柱式microRNA抽提试剂盒

产品货号：

GS0115

中文名称：

柱式microRNA抽提试剂盒

英文名称：

SgPrep Column microRNA Extraction Kit

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒可用于分离纯化miRNA，siRNA，snRNA等小于200nt的小分子RNA，也可用于总RNA的提取。本试剂盒采用的microRNAExtractor具有超强的裂解能力和抽提灵敏度，结合试剂盒采用的特殊吸附膜，大大增加了小分子RNA的吸附力，获得的小RNA纯度好，得率高，可以直接用于各种下游实验，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。本试剂盒适用于各种样品，如动植物组织及细胞等。

适用范围广，可用于多种样品microRNA及总RNA的抽提纯化。
操作简单快速，整个过程30分钟左右完成。
纯度好，得率高，可以直接用于各种下游实验。

组分	规格
microRNAExtractor	60mL
RPE Solution	12mL
RNase-free water	5mL
吸附柱TR及收集管	50套
吸附柱MR及收集管	50套

保存：2～8℃避光。

注意事项

microRNAExtractor是强腐蚀性物质，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

试剂准备

自备试剂：无水乙醇、氯仿、RNase-free water等。
按瓶身标签说明在RPE Solution中加入4倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持RPE Solution中的乙醇含量。若RPE Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
RNase是导致RNA降解最主要的物质，广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，因此制备RNA时必须经常更换手套，同时戴上一次性口罩和卫生帽，并保证仪器及环境清洁。
样品保存：匀浆后，加氯仿前，样品可在-70℃放置一个月以上；提取的RNA样品可以在70%酒精中-20℃保存2个星期以上；如果需要长期保存，请于超低温冰箱中保存。

植物组织：取新鲜样品在液氮中充分研磨或将其剪碎后直接在microRNAExtractor中研磨。约50～100mg样品使用1mL microRNAExtractor。
动物组织：取新鲜或-70℃冻存组织，每25～50mg组织加入1mL microRNAExtractor，用液氮研磨或用匀浆器匀浆处理。
- 样品也可以在液氮中充分研磨或将其剪碎后直接在microRNAExtractor中研磨。
单层培养细胞的收集：可直接在培养容器中裂解（培养面积不超过10cm²，细胞不超过2×10⁷），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。
- 直接裂解法：直接在培养板中加入microRNAExtractor裂解细胞，每10cm²面积加1mL microRNAExtractor。用移液器吹打混匀。
  - microRNAExtractor加量根据培养板面积决定，而不是由细胞数决定，如果加入的量不够，将导致提取的RNA中有基因组DNA污染。
- 胰蛋白酶处理法：收集细胞并大致确定细胞数量，用PBS洗涤细胞后，向细胞中加入含有0.1～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5000rpm离心5min，收集细胞沉淀，去除上清。每10cm2面积加1mL microRNAExtractor。用移液器吹打混匀。
  - 收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低RNA得率。
细胞悬液：离心收集细胞。每10⁷动物、植物细胞加入1 microRNAExtractor。
- 加入microRNAExtractor前不要洗涤细胞，以免RNA降解。
血液处理：取0.5mL新鲜或冻融的血液，10000rpm离心2min，去除血浆，再加入500μL RNase-free Water（处理血液用RNase-free water需自备）悬浮沉淀，10000rpm离心2min，弃上清，加入1mL microRNAExtractor，充分振荡混匀。

标准抽提步骤1(总RNA抽提)：
- 将裂解后样品或匀浆液室温放置5～10min，使得核蛋白与核酸完全分离。
  - 样品中如含有较多的蛋白质、多糖、脂肪或其他细胞外基质，可以12000rpm离心10分钟，移去漂浮的油脂，取上清。
- 加入0.2mL氯仿，剧烈振荡30sec，室温放置3min。12000rpm 4℃离心10min。
  - 如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟。
  - 样品会分成三层：上层水相，中间层和下层有机相。RNA在上层水相中。
- 吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入1.5倍体积无水乙醇(如540μL上清液需加入810μL无水乙醇)，混匀。
  - 不要吸取任何中间层物质，否则会出现基因组DNA污染。
  - 加入无水乙醇后，可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响提取和应用。
- 将吸附柱TR放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加至吸附柱中，静置1min，12000rpm离心2min，倒掉收集管中废液。
  - 吸附柱最大有效体积为750μL，如果混合液较多，可分两次转移至吸附柱。
- 将吸附柱TR放回收集管中，加入500μL RPE Solution，静置2min，10000rpm离心30sec，倒掉收集管中废液。
  - RPE Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
- 重复步骤5一次。
- 将吸附柱TR放回收集管中，12000rpm离心2min。
  - 此步骤是将吸附柱中残留的漂洗液去除，离心后将吸附柱室温放置2min以充分晾干，以免残余的乙醇影响后续实验。
- 将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30μL RNase-free water，静置2min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
  - RNA在-70℃保存，以防降解。
  - 请勿使用小于30μL的洗脱液进行洗脱。
标准抽提步骤2(小RNA抽提)：
- 将裂解后样品或匀浆液室温放置5～10min，使得核蛋白与核酸完全分离。
  - 样品中如含有较多的蛋白质、多糖、脂肪或其他细胞外基质，可以12000rpm离心10分钟，移去漂浮的油脂，取上清。
- 加入0.2mL氯仿，剧烈振荡30sec，室温放置3min。12000rpm 4℃离心10min。
  - 如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟。
  - 样品会分成三层：上层水相，中间层和下层有机相。RNA在上层水相中。
- 吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入1/3倍体积无水乙醇（如540μL上清液需加入180μL无水乙醇），混匀。
  - 不要吸取任何中间层物质，否则会出现基因组DNA污染。
- 将吸附柱TR放入收集管中，将上述全部溶液加至吸附柱中，静置1min，12000rpm离心2min，弃吸附柱，收集流穿液到干净的离心管中（约690μL）。
- 加入2/3倍体积无水乙醇（如690μL流穿液加入460μL无水乙醇），混匀。用移液器将全部溶液加至吸附柱MR中，静置1min，12000rpm离心2min，倒掉收集管中废液。
  - 吸附柱最大有效体积为750μL，如果混合液较多，可分两次转移至吸附柱。
- 将吸附柱MR放回收集管中，加入500μL RPE Solution，静置2min，10000rpm离心30sec，倒掉收集管中废液。
  - RPE Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
- 重复步骤6一次。
- 将吸附柱MR放回收集管中，12000rpm离心2min。
  - 此步骤是将吸附柱中残留的漂洗液去除，离心后将吸附柱室温放置2min以充分晾干，以免残余的乙醇影响后续实验。
- 将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30μL RNase-free water，静置2min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
  - RNA在-70℃保存，以防降解。
  - 请勿使用小于30μL的洗脱液进行洗脱。

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